JBRA Assist. Reprod. 2003; 07(1):7-10
ARTIGO ORIGINAL
doi: 10.5935/1518-0557.2003.7.1.02
Análise da Morfologia Espermática Correlacionada com a Morfologia Pré-embrionária
Correlation Between Sperm Morfologie and Embryo Quality After ICSI
Resumo
Introdução: A injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI) descrita por Palermo et al. em 1992, mudou consideravelmente o tratamento do fator masculino no casal infértil. Surgiram muitas dúvidas a respeito da qualidade dos espermatozóides e por esse motivo a análise da morfologia espermática tornou-se um parâmetro extremamente importante na avaliação da amostra de sêmen. Geralmente essa análise é realizada antes do procedimento de ICSI e nos deixa dúvidas a respeito de como seria esse resultado no dia do procedimento. O objetivo desse trabalho foi determinar se existe correlação entre a morfologia espermática e a qualidade embrionária, quando foram analisadas as amostras seminais do dia da ICSI.
Material e Métodos: Este estudo incluiu 71 pacientes que procuraram nosso Centro para tratamento de infertilidade entre maio e agosto de 2000. Em todos os casos foi realizada a análise da morfologia na amostra de sêmen no dia da ICSI de acordo com os critérios estritos de Krüger. Foram feitas as lâminas com 10μl da amostra liquefeita de sêmen para a análise da morfologia.
Resultados: As amostras de sêmen de 71 pacientes foram analisadas e comparadas com a classificação embrionária (Veeck, 1991). Nossos resultados mostraram que amostras seminais com parâmetros pobres produzem, na maioria das vezes, embriões de má qualidade.
Conclusão: Nossos resultados nos permitem concluir que a análise da morfologia espermática usando os critérios estritos de Krüger, no dia do procedimento terapêutico, teve influência na qualidade dos embriões.
Unitermos: Espermatozóide, Morfologia, Critério de Krüger, Qualidade embrionária.
Abstract
Objective: Intracytoplasmatic sperm injection (ICSI) described by Palermo et al. in 1992 has dramatically changed the treatment of severe male factor infertility. Many doubts about the spermatozoa quality have appeared, because of that the spermatozoa morphology became extremely important in the semen evaluation. Generally the sperm morphology analysis is done before the procedure and let us to think if the sample obtained in the ICSI day would be value different. The objective of this work is to determine the correlation between spermatozoa morphology and embryo quality when the sperm samples analysis was realized in the same day of ICSI procedure.
Material and Methods: This study included 71 patients who underwent our ICSI cycles from May to August 2000. In all cases were realized the sperm morphology analysis on the ICSI day according to Krüger Strict Criteria. Slides with 10μl of fresh and liquefied semen were done to analyze the sperm morphology.
Results: The semen samples of 71 patients were analyzed and compared with embryonic classification by Veeck (1991). Our results showed that seminal samples with poor sperms parameters produced, in the most of times, bad quality embryos.
Conclusion: The analysis of these results allow us to conclude that spermatic morphology using Kruger Strict Criteria in the day of the therapeutic procedure has influence in embryo quality.
Keywords: Sperm, Morphology, Kruger Criteria, Embryo Quality.
Introdução
Com a introdução da injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI) por Palermo et al. 1992, o fator masculino pode ser quase sempre contornado com sucesso. Entretanto, surgiram dúvidas em relação à qualidade dos espermatozóides usados, tornando o estudo das características morfológicas dos espermatozóides extremamente importante para a avaliação de uma amostra de sêmen.
Para a análise da morfologia, em geral, são utilizadas as recomendações técnicas da Organização Mundial de Saúde (OMS) ou os critérios estritos de Krüger. No primeiro caso uma amostra normal é aquela que apresenta mais de 30% de espermatozóides ovais. No segundo caso a amostra é considerada normal quando pelo menos 14% dos espermatozóides são ovais (Krüger et al., 1998; Oehninger et al., 1998). Entretanto, a comparação de resultados se torna difícil (Parinaud et al., 1 993) devido à existência de diferentes critérios de avaliação; cada centro avalia a morfologia de acordo com os critérios de sua escolha.
Ménézo et al. (2000) dizem que pelo fato da seleção dos espermatozóides usados na ICSI ser realizada somente em relação a aspectos morfológicos e de motilidade no momento da injeção, a avaliação da qualidade destes é muito variável e, portanto, provavelmente estas características não tenham relação com a qualidade de desenvolvimento do embrião. Segundo Oehninger et al. (1998), parâmetros espermáticos pobres não contribuem para um desenvolvimento embrionário de baixa qualidade. Já Parinaud et al. (1993) propuseram que a qualidade pré-embrionária está relacionada com a qualidade dos espermatozóides. Ron-El et al. (1991) relataram atraso de fertilização e baixo desenvolvimento pré-embrionário associado com a qualidade seminal após fertilização in vitro. Em geral a análise da morfologia espermática é realizada em amostras colhidas antes do dia do procedimento e deixam dúvida se esta análise no dia do procedimento, seria diferente. Este trabalho tem como objetivo determinar se a morfologia dos espermatozóides utilizados no procedimento de ICSI se correlaciona com a qualidade dos pré-embriões gerados, quando analisamos as amostras seminais colhidas no dia do procedimento terapêutico.
Material e Métodos
O estudo foi realizado no período de maio a agosto de 2000, em 71 pacientes que se submeteram ao procedimento de ICSI na Unidade de Reprodução Humana do Hospital Israelita Albert Einstein . Em todos os casos foi realizada a análise da morfologia dos espermatozóides da amostra de sêmen colhida no dia do procedimento de ICSI segundo os critérios estritos de Krüger (Krüger et al., 1998). As amostras de sêmen foram obtidas por masturbação e o processamento foi realizado pelo método de centrifugação em gradiente descontínuo de Isolate (Irvine Scientific cód.: 99.257, 99.258).
Foi realizado um bloqueio ovariano com análogo de GnRH seguido de uma hiperestimulação ovariana controlada, induzida pela administração de: gonadotrofina menopausal humana, urofolitrofina (FSH) ou FSH recombinante. Quando um folículo alcançava de 20-22mm de diâmetro máximo, o hCG era administrado via intramuscular. Após 34-36 horas do hCG os folículos eram aspirados com o auxílio de ultra-som transvaginal. A micromanipulação era realizada em placas de petri de plástico (Falon, USA) em microgotas de 5ml de meio HTF modificado (Irvine Scientific, USA), suplementado com 5% de albumina sérica humana (Irvine Scientific, USA)(RON-EL, 1991). A fertilização foi verificada de 17-21 horas após a injeção e a qualidade morfológica dos pré-embriões foi determinada segundo os critérios morfológicos estabelecidos por Veeck (1991).
As lâminas para a morfologia foram montadas com 10μl de sêmen fresco e liquefeito e foi feito um esfregaço fino. A coloração foi feita pelo método de Papanicolau modificado como descrito pela OMS (1999). As lâminas foram analisadas sob aumento de 1.000 vezes usando-se óleo de imersão e foram analisados 100 espermatozóides em 10 campos no mínimo.
Resultados
Foram analisadas as amostras seminais de 71 pacientes quanto à morfologia espermática e os resultados foram correlacionados com a classificação embrionária (Tabela I). Os embriões foram divididos em dois grupos de acordo com sua morfologia: embriões de melhor qualidade (classe I e II) e embriões de qualidade inferior (classe III, IV e V). Verificamos que amostras de sêmen que apresentavam 8% ou mais de forma ovais são as que estão correlacionadas com a formação de pré-embriões de melhor qualidade (classe I e II). Como pode ser visto na Tabela I e no Gráfico I.
Tabela I. Qualidade Embrionária nos Diferentes Grupos de Morfologia Espermática
Grafico 1. Correlação entre morfologia espermática e a probabilidade de PE ciasse III (1. morfoiogla espermática, 2. probablildade de PE ciasse III).
A análise estatística foi realizada através de regressão logística dos dados, e foi verificada a chance de um embrião apresentar classificação morfológica igual ou maior que III em relação ao resultado da morfologia espermática das amostras seminais. O nível de significância adotado foi de p < 0,05. A estimativa de Odds Ratio foi de 0,009, com limites de confiança de (0,001), (0,226); o que significa que a cada aumento de uma unidade no resultado da morfologia espermática, a probabilidade de um embrião ser classe igual ou maior que III diminui em 0,009.
Discussão
Segundo Oehninger et al. (1998) e Host et al. (1999) parâmetros seminais de baixa qualidade não contribuem para um mau desenvolvimento pré-embrionário. Esses mesmos autores acreditam também que o critério estrito de Krüger não tem valor preditivo nos resultados da FIV Nos trabalhos de Oehninger et al. (1998) e Host et al. (1999) foram correlacionados qualidade seminal com taxas de fertilização, clivagem, implantação e gestação e em ambos os trabalhos não foi encontrada diferença estatística significativa na análise dos resultados. Portanto, eles sugerem que a qualidade do sêmen não interfere na qualidade dos préembriões formados.
Entretanto, a opinião de que a morfologia espermática não tem importância para o desenvolvimento pré-embrionário não é unânime. De acordo com nossos resultados as amostras seminais com parâmetros morfológicos pobres na maioria dos casos geravam pré-embriões de baixa qualidade. Quando se utilizava sêmen de doador cujos parâmetros seminais eram de melhor qualidade, os pré-embriões gerados eram de qualidade superior. Observando esses fatos, desenvolveu-se o presente trabalho relacionando a qualidade morfológica seminal com a pré-embrionária. Os resultados demonstram uma relação direta entre a morfologia espermática e a qualidade dos pré-embriões gerados. Foi observado que quanto maior o percentual de espermatozóides normais, ou seja, quanto maior a porcentagem de espermatozóides ovais, maior é a chance de um embrião ser classe I ou II (Tabela I e Gráfico I) e de acordo com Mizrahi et al. (1999) provavelmente maior a chance de gestação.
Parinaud et al. (1993) sugeriram que o espermatozóide está envolvido na qualidade pré-embrionária desde os primeiros estágios do desenvolvimento e demonstraram que existe uma relação entre espermatozóides morfologicamente anormais e a baixa qualidade embrionária. Ron-El et al. (1991) relataram atraso de fertilização e baixo desenvolvimento préembrionário associado com a qualidade seminal após a fertilização in vitro.
Em estudo descrito por Krüger et al. (1988) pacientes com quantidade de espermatozóides ovais abaixo de 4% tiveram taxa de fertilização de 7.6% e pacientes com morfologia espermática entre 4 e 14% tiveram um aumento significativo de fertilização para 63.9%, demonstrando assim a existência de correlação entre taxa de fertilização e porcentagem de espermatozóides normais.
A análise dos resultados nos permite concluir que a morfologia espermática avaliada pelos critérios estritos de Krüger, no dia do procedimento terapêutico, tem influência na qualidade embrionária.